Extracto de hoja de Engelhardia Roxburghiana DHQfabricante
Extracto de hoja de Engelhardia Roxburghiana dihidroquercetinaes un compuesto de dihidroflavonol que se encuentra en muchas plantas. Además de la dihidroquercetina sintética comercializada, la principal fuente natural es el alerce. Nuestra empresa ha descubierto mediante investigaciones sobre las hojas de Astragalus membranaceus que las hojas naturales de Astragalus membranaceus también contienen dihidroquercetina. A medida que los recursos de alerce son cada vez más escasos, el descubrimiento de nuestra empresa puede reducir en gran medida el costo de producción de dihidroquercetina y proporcionar los productos de dihidroquercetina más rentables del mercado.
Como mayor productor de dihidroquercetina en China, KINTAI tiene dos rutas de proceso principales para preparar dihidroquercetina: biosíntesis y extracción. La dihidroquercetina que producimos actualmente se extrae principalmente del alerce y una parte de las hojas de wolfberry. La biosíntesis está a punto de entrar en la prueba piloto de producción y, una vez completada, le brindará productos de dihidroquercetina de alta calidad y bajo costo. A continuación, presentamos principalmente el proceso de extracción actual de nuestra empresa utilizando hojas de baya de goji y el método de síntesis de biosíntesis. Si está interesado en más detalles, contáctenos para obtener respuestas más profesionales.
KINTAI Proceso de extracción de dihidroquercetina de hojas amarillas de wolfberry
Nuestra producción adopta un proceso de varios pasos para garantizar la pureza y la alta calidad deExtracto de hoja de Engelhardia Roxburghiana DHQ.
Procesamiento de materia prima: seleccione hojas frescas de baya de goji amarilla, elimine las impurezas y córtelas para garantizar que los ingredientes activos se liberen por completo en el proceso de extracción posterior.
Extracción y concentración:Utilice una solución de etanol al 80% para dos extracciones a reflujo. Agregue 6 veces la cantidad de etanol por primera vez y 5 veces la cantidad de etanol por segunda vez para garantizar una extracción eficiente de los ingredientes activos en las hojas de baya de goji amarilla. El extracto se concentra a presión reducida para eliminar el etanol y garantizar la seguridad del producto.
Purificación por cromatografía en columna:Utilice resinas de adsorción macroporosas como D101, AB-8 y NKA-II para una mayor separación y purificación. El proceso de elución es bueno y se utiliza una solución de etanol al 70% para la elución. El extracto es de color transparente.
Cristalización:Mediante una concentración precisa de disolvente y un proceso de enfriamiento, se generan cristales en forma de aguja de dihidroquercetina de color amarillo claro.
Hidrólisis:El extracto se hidroliza y recristaliza para obtener dihidroquercetina de alta pureza con un contenido de 95,7%-96.5%.
Análisis de cromatograma HPLC
Durante el proceso de producción, toda la dihidroquercetina se prueba mediante cromatografía líquida de alto rendimiento para garantizar la alta pureza y eficiencia del producto. Como se muestra en la figura, el análisis preciso del cromatograma de HPLC muestra el contenido de dihidroquercetina.
COA& Informe de análisis de cromatografía líquida de DHQ
La última investigación de Kintai sobre la síntesis de dihidroquercetina.
Nuestro equipo de investigación ha logrado recientemente un importante avance en el estudio de la síntesis microbiana de dihidroquercetina.
La dihidroquercetina es un importante compuesto flavonoide que se utiliza ampliamente en la alimentación, la medicina y la agricultura debido a sus actividades antioxidantes, antiinflamatorias, antitumorales y otras actividades fisiológicas. Sin embargo, los métodos tradicionales de extracción de plantas están limitados por las estaciones, las condiciones geográficas y el suministro de materia prima, lo que genera altos costos de producción y una producción inestable. Por tanto, el uso de microorganismos para la síntesis heteróloga de dihidroquercetina se convierte en una opción atractiva.
La síntesis microbiana no sólo puede evitar estos obstáculos en la extracción de plantas, sino que también tiene las ventajas de un ciclo de producción corto, bajos requisitos ambientales y un fácil control de calidad. Sin embargo, debido a las limitaciones de factores como la regulación metabólica, cómo lograr de manera eficiente la síntesis de dihidroquercetina en microorganismos sigue siendo un desafío importante. Mediante la detección de enzimas clave, la ingeniería de promotores, la integración de copias múltiples y la reprogramación metabólica, hemos mejorado significativamente la producción de dihidroquercetina y brindamos una forma efectiva para su producción industrial.
Detección y optimización de enzimas clave F3'H y F3H.
El proceso de síntesis de dihidroquercetina se basa en la catálisis de dos enzimas clave, F3'H y F3H. F3'H cataliza la hidroxilación de (2S)-naringenina en la posición C-3' del esqueleto de flavonoide para generar (2S)-eriodictiol; F3H convierte la (2S)-naringenina en dihidrokaempferol. Para mejorar la producción de dihidroquercetina, seleccionamos tres F3'H y cinco F3H de diferentes plantas. Después de los experimentos, se descubrió que SmF3'H y CsF3H tenían los mejores efectos catalíticos, produciendo (2S)-eriodictiol y dihidrokaempferol con rendimientos de 254,1 mg/L y 173,4 mg/L respectivamente. Por lo tanto, seleccionamos estas dos enzimas para su posterior optimización de la síntesis.
Optimización de proyectos promotores
Para mejorar aún más la expresión de SmF3'H y CsF3H, introdujimos ingeniería de promotores y optimizamos los niveles de expresión de estas enzimas clave. Al seleccionar promotores de diferentes potencias, se encontró que cuando SmF3'H y SmCPR se expresaban bajo el control de los promotores PGAL1 y PGAL10, el título de (2S)-eriodictiol era el más alto, alcanzando 382,1 mg/l. De manera similar, aumentamos significativamente la producción de dihidrokaempferol regulando la expresión de CsF3H y usando promotores de diferentes potencias como PTDH1, PGAL7 y PSSA1. Esta optimización muestra que al aumentar el nivel de expresión de enzimas clave, se puede mejorar eficazmente la eficiencia de la síntesis de los metabolitos objetivo.
La integración de copias múltiples mejora la producción
Para mejorar aún más la producción de dihidroquercetina, adoptamos tecnología de integración de múltiples copias de genes. Al integrar la copia del gen de la vía de síntesis de dihidroquercetina en el sitio de múltiples copias Ty2 de Saccharomyces cerevisiae, obtuvimos con éxito una cepa FQ26ty de alta producción, cuyo título de dihidroquercetina alcanzó 71,4 mg/l. El análisis cuantitativo de genes mostró que el número de copias de los genes SmF3H, SmF3'H y SmCPR oscilaron entre 2,87 y 3,44, lo que indica que la integración de múltiples copias de genes mejoró significativamente la producción de dihidroquercetina. Además, al integrar aún más copias de los genes de la vía de síntesis, construimos la serie de cepas FQE-D y aumentamos con éxito la producción de dihidroquercetina a 74,5 mg/l. Este resultado demuestra que aumentar el número de copias de genes clave de la ruta sintética es una estrategia eficaz para aumentar el rendimiento de los productos objetivo.
Reprogramación metabólica y optimización del metabolismo del carbono.
Además de optimizar enzimas clave y la integración de genes, también reprogramamos metabólicamente el sistema de metabolismo del carbono de Saccharomyces cerevisiae para aumentar aún más la producción de dihidroquercetina. Primero, introdujimos genes relacionados con la vía PAL, incluidos AtPAL2, AtC4H, AtATR2 y ScCYB5, y la cepa resultante FQ27 logró una producción de dihidroquercetina de 87,8 mg/l. Posteriormente, aumentamos aún más el rendimiento a 103,9 mg/l sobreexpresando los genes clave ARO1/2/3 de la vía del shikimato y el gen EcAROL derivado de E. coli. Además, también introdujimos una vía de fosfocetolasa heteróloga para conectar estrechamente el metabolismo central del carbono con la síntesis de eritrosa-4-fosfato, y luego obtuvimos la cepa FQ29 con una producción de dihidroquercetina de 107,5 mg/L.
Optimización del suministro de NADPH y alfa-cetoglutarato
F3'H necesita consumir NADPH durante el proceso catalítico, mientras que F3H requiere -cetoglutarato como cosustrato. Por lo tanto, para aumentar el suministro de estas dos sustancias clave, sobreexpresamos genes como TYR1 y ZWF1 para aumentar el suministro de NADPH. Los experimentos muestran que la coexpresión de TYR1 y el mutante BDH1* aumenta la producción de dihidroquercetina en un 20,2 %, alcanzando 175,8 mg/l. Además, la sobreexpresión de ARO8 promovió aún más la producción de -cetoglutarato, lo que resultó en una producción de dihidroquercetina que alcanzó 206 mg/L. Finalmente, al sobreexpresar IDH1, obtuvimos una cepa FQ38 de alto rendimiento con un rendimiento de 235,1 mg/L.
Exploración de la producción industrializada.
Basándonos en la optimización a escala de laboratorio, realizamos además experimentos de fermentación discontinua en un biorreactor de 5 L. Al agregar 5 g/L de CaCO3 durante el proceso de fermentación, logramos aumentar con éxito el título de dihidroquercetina a 873,1 mg/L en 114 horas, estableciendo un nuevo récord de producción.
En resumen, hemos mejorado significativamente la eficiencia de la síntesis microbiana de la dihidroquercetina mediante la ingeniería metabólica sistemática y la optimización del proceso de fermentación. Esta investigación no sólo proporciona una base técnica para la producción industrial de dihidroquercetina, sino que también proporciona una referencia para la síntesis microbiana de otros metabolitos secundarios vegetales.
Diversas aplicaciones
Suplementos dietéticos
Alimentos funcionales
Productos cosméticos
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